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ABBILDUNGSVERZEICHNIS 10

Abbildung 2.16: SDS PAGE der ROL aus Pichia pastoris kultiviert in komplexem Medium.___________66

Abbildung 2.17: SDS PAGE der ROL aus Pichia pastoris kultiviert in synthetischem Medium._________68

Abbildung 2.18: Einfluß des pH-Wertes auf die Aktivität der ROL aus E. coli und P. pastoris. _________71

Abbildung 2.19 Einfluß der Temperatur auf die Aktivität der ROL aus E. coli und P. pastoris. _________72

Abbildung 2.20: Korrelation zwischen EGFP Konzentration und gemessener Fluoreszenz._____________76

Abbildung 2.21: Klonierungsstrategie für die Fusion der PeptidTags an das 5´-terminale Ende des EGFP._78

Abbildung 2.22: Medium Throughput Screening (MTS) mit Qiagen Ni-NTA Säulen zur Validierung von

HeliTags._______________________________________________________________81

Abbildung 2.23: PHAST Gel der Reinigung von EGFP mit dem HeliTag M13 mit Ni-NTA-Säulen. _____82

Abbildung 2.24: Verlauf der Metallaffinitäts-Reinigung von HeliTag M13-EGFP. ___________________83

Abbildung 2.25: Reinigung von HeliTag M13-EGFP durch IMAC. _______________________________85

Abbildung 2.26: Verhalten von EGFP ohne Tag bei der IMAC.__________________________________85

Abbildung 2.27: Schematische Darstellung der verschiedenen ROL-Konstrukte mit dem HeliTag M13. __88

Abbildung 3.1: Vergleich des Auftretens von Lipaseaktivität im Fermenterüberstand bei Kultivierung in

komplexem Medium (Fermentationen 1 + 3) und synthetischem Medium

(Fermentationen 4 + 5 + 6). ________________________________________________95

Abbildung 5.1: Schematische Darstellung der Mutagenese mit Quick Change. ____________________126

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